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超凈工作臺在獼猴桃組織培養繁殖與工廠化育苗實驗中的應用
發布時間:2012-06-06 08:02:47   瀏覽:8082

   超凈工作臺在獼猴桃組織培養繁殖與工廠化育苗實驗中的應用

   植物組織具有無限增殖和產生不定芽、不定根的能力。在培養條件適宜時,用一個芽可以培養出許多植株來。其在保持優良砧木及品種種性、進行工廠化育苗方面具有很好的意義。其方法步驟如下。

 

    一、外植體接種與材料消毒

    取田間當年生新梢或一年生枝蔓,去葉,用肥皂水將表面刷洗,并用自來水沖洗干凈,剪成一芽一段,放入干凈燒杯,拿進超凈工作臺;先用70%酒精過一下,無菌水(用高壓鍋,在120℃下,滅菌30分鐘的水)沖洗3遍;再用0.1%升汞液消毒5~10分鐘,無菌水沖洗3遍;然后用酒精燈火焰消毒過的工具(鑷子、剪刀、撥針、解剖刀等)剝去鱗片、葉柄,取出帶數個葉原基的幼芽接入培養基,半包埋。

 

    培養基配好后裝入廣口的罐頭瓶、三角瓶或試管,裝入量為1~2厘米高。120℃滅菌30分鐘后備用。

 

    外植體接種后放到培養室的培養架上培養。培養條件為:光照1000勒克斯,8~10個小時,暗14~16小時;溫度25~28℃。培養1~2周,即可看出是否消毒徹底,有無感染。及時檢查,將未感染的外植體轉接到新的培養瓶內,丟棄已感染的外植體。

 

    二、繼代繁殖

    上述接入的外植體培養1~2個月,即可長到2~3厘米長。在超凈工作臺上,將其剪成約1厘米長莖段,接種到新的培養基中(培養基的配方同上)。剪莖段時所用工具和培養皿(或牛皮紙)都要經過消毒,消毒方法分別同上述酒精燈消毒法和高壓消毒法。

 

    其后,大約每25天左右進行一次繼代培養。每次的莖段增殖量約為3~4倍。反復進行,直到所需數量。

 

    三、生根

    上述培養的莖段長到2厘米以上時,即可用于生根。生根培養基的成分為上述培養基的大量元素減半,除激素和蔗糖外,其他成分不變。

 

    生根培養基配好后也需高壓滅菌(120℃,30分鐘)后使用。

 

    生根培養20天左右,莖段上即可長出根,成為完整苗。生根苗長到3~5厘米長時即可鍛煉、移栽。

 

    四、生根苗的鍛煉、移栽

    (一)鍛煉

 

    組培苗在人工培養條件下長期生長,對自然生長環境的適應性減弱。移栽前需要一個過渡階段,即鍛煉。鍛煉方法為:將培養瓶移至自然光照下2~3天,打開瓶口2~3天,再移栽。

 

    (二)移栽

 

    移栽時先洗凈根上培養基,避免培養基感染雜菌致苗死亡。移栽方法及灌水、遮陽等管理同實生苗移栽。但注意組培苗比較嬌嫩,需輕盈操作。

 

    五、工廠化育苗

 

將上述培養基制備及超凈工作臺相關、裝瓶、消毒、無菌苗增殖、生根、鍛煉、移栽等過程全部放在實驗室和溫室中進行,即為工廠化育苗。目前,這樣的生產線已在意大利和法國投入使用。但外植體接種尚需人工操作。

 

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